新型冠狀病毒（2019-nCoV）檢測方法介紹-蛋白檢測

冠狀病毒外形呈球形，在病毒包膜外有明顯的棒狀膜外粒子，膜外粒子形狀酷似中世紀歐洲帝王王冠的結(jié)構，因此得名“冠狀病毒”。冠狀病毒主要由核酸基因（RNA）以及有基因編碼的外殼蛋白兩部分組成。外殼蛋白包括棘突蛋白（S蛋白）、包膜蛋白（E蛋白）、膜蛋白（M蛋白）以及核衣殼蛋白（N蛋白）組成。其結(jié)構圖如下：

2019新型病毒是目前發(fā)現(xiàn)的第七種感染人體的冠狀病毒。通過對新冠病毒編碼的蛋白進行檢測，可判定患者是否被感染。蛋白檢測主要依賴于ELISA技術平臺及免疫層析技術平臺。

ELISA檢測平臺

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附技術）是利用酶的高效催化放大作用與特異性抗原-抗體反應相結(jié)合而建立的一種標記免疫技術。根據(jù)檢測原理的不同可分為直接法、間接法、雙抗夾心法、競爭法四種。2019-nCoV蛋白使用雙抗夾心法進行檢測，其實驗流程為：

1. 將配對抗體中的一株抗體固定至固相載體表面，并保持其免疫活性；
2. 將另一株抗體與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標抗體，此酶標抗體既保留其免疫活性，又保留其酶活性；
3. 測定時將待測樣本固相載體孵育，形成抗原-抗體復合物，再通過洗滌將未與固相載體結(jié)合的物質(zhì)分開；
4. 加入酶標抗體，通過反應結(jié)合到固相載體上（此時固相載體上為“抗體-抗原-酶標抗體”復合物，即雙抗夾心）；
5. 加入酶反應底物，底物被酶催化后顯色，根據(jù)顏色深淺可以定性分析是否含有2019-nCoV抗原。

免疫層析技術

免疫層析技術是20世紀90年代初在免疫滲濾技術的基礎上建立的一種簡易快速的免疫學檢測技術。該技術利用了抗原抗體特異性結(jié)合的特性，首先將能夠同時結(jié)合同一抗原的一對抗體分別固定于免疫層析檢測試紙條的檢測線（T線）與結(jié)合墊上，結(jié)合墊上的抗體帶有顯色標記（熒光標記或膠體金標記）。在試紙條滴樣處滴加樣品，樣品會向試紙條另一端流動，當流動至結(jié)合墊，樣品中的抗原會和結(jié)合墊上的標記抗體結(jié)合，形成“標記抗體-抗原”復合物，當樣品流動至檢測線時，抗原會被T線上的抗體捕獲，形成“標記抗體-抗原-捕獲抗體”復合物，隨著T線上捕獲抗原的不斷增加，T線會出現(xiàn)愈加明顯的顏色變化。如果T線出現(xiàn)顏色變化，則說明待測樣本中含有待測抗原。

常見檢測平臺

• 1. 膠體金平臺
• 2. 免疫熒光平臺

ELISA檢測與免疫層析檢測方法對比

ELISA檢測具有技術可靠、試劑方便易得、靈敏度更高等優(yōu)點，免疫層析檢測具有測定更為方便、快速、不需要儀器，隨到隨測等優(yōu)點。

參考文獻

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[3]. 隋菊英. 膠體金免疫層析法和ELISA法在HBsAg檢測中的方法學評價[J]. 中國醫(yī)藥導報(36):81-82.

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