胃蛋白酶原（PG）的定量檢測方法

胃蛋白酶原（PG）是一種胃蛋白酶非活性前體，包含PGⅠ和PGⅡ兩個亞群。人體血清胃蛋白酶原的含量變化可反應胃粘膜的功能情況。血清PGⅠ和PGⅠ/PGⅡ（PGR）值下降是臨床早期胃癌篩選的有效指標。除了PG水平，臨床上還需結合患者體內G17水平、幽門螺桿菌（HP）水平以及胃鏡活檢等其他檢測結果才能做出準確的診斷。胃蛋白酶原的臨床定量檢測方法較多，目前主要有流式熒光發光免疫微球、時間分辨熒光免疫、乳膠增強免疫比濁、化學發光免疫分析、酶聯免疫吸附以及放射免疫分析等方法。

原理簡介

1. 流式熒光發光免疫微球分析技術（Flow fluorenscence immunmicrobeads assay, FFIA）

該技術以熒光編碼微球和雙激光流式檢測技術為核心，通過熒光標記PG抗體溶液，加入檢測樣本，再加入交聯特異性捕獲抗體的熒光編碼微球懸液，形成夾心復合物（交聯捕獲抗體的編碼微球-PG抗原-熒光標記PG抗體復合物）。復合物被鞘液隔開逐一通過激光檢測，通過不同的激光通道分別識別出編碼的微球和熒光標記PG抗體。編碼微球上的標記抗體熒光值與樣本中的PG抗原呈正比，再通過相應的校準品標準曲線計算出相應的樣本PG含量。

2. 時間分辨熒光免疫分析（Time-resolved fluoroimmunoassay, TRFIA）

在熒光分析的基礎上發展而來。利用鑭系元素熒光壽命長的特點，根據波長和時間進行信號分辨，有效排除非特異性熒光。采用鑭系元素標記胃蛋白酶原抗原；與檢測樣本發生免疫反應，最后檢測熒光強度來判定樣品中抗原的水平。

3. 乳膠增強免疫比濁（Particle enhanced turbidimetric immunoassay, PETIA）

由免疫比濁的方法發展而來，分為散射比濁和透射比濁兩種檢測法。其原理相似，都是將單克隆PG抗體交聯到膠乳顆粒表面；加入檢測樣本，發生免疫反應，生成抗原-抗體-膠乳顆粒復合物；反應液的散光性或透光性能改變，其濁度變化程度與樣本中的胃蛋白酶原抗原濃度呈正相關。

4. 化學發光免疫分析（Chemiluminescence immunoassay, CLIA）

此方法原理是用發光物質或酶標記PG抗體，與樣本中的胃蛋白酶原抗原反生免疫反應后，加入氧化劑或者酶底物而發光，通過檢測發光強度，根據標準曲線判定樣本中PG抗原濃度。其標記物主要有化學發光物質、酶標記兩類；常用標記物分別為吖啶酯類化合物（AE）和辣根過氧化物酶(HRP)。

5. 酶聯免疫吸附試驗（Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）

常用的反應方式有雙抗夾心、競爭、間接、直接ELISA。其原理用酶標記的抗體或者抗原指示免疫反應，先將已知的抗原或抗體包被在固相載體表面，使免疫反應在固定相上進行。通過酶底物顯色反應判定是否存在免疫反應，根據顏色深淺進行半定量，目前常用標記物為HRP。

6. 放射免疫分析（Radioimmunoassay, RIA）

主要原理是競爭性抑制，利用放射性核素標記提純的PG抗原，待測樣本中的PG抗原與標記PG抗原共同與定量的PG抗體結合。反應平衡后，通過測定放射性強度，求得未標記的樣本PG抗原含量。

檢測方法比較

如表1所示，放射免疫分析由于其示蹤物質具有放射性，所以應用受限，普適性差。ELISA成本低，可進行定性和半定量，適用于基層醫院。近年來乳膠增強免疫比濁、化學發光免疫分析應用廣泛，這兩種方法成本相對較低，靈敏度高于ELISA，適用于大、中型醫院。流式熒光發光免疫微球和時間分辨熒光免疫分析靈敏度高，但成本高，檢測需要配備昂貴的儀器，適用于有條件的醫院。

表1 檢測方法比較

檢測方法	優點	缺點
FFIA	靈敏度較高，可同時檢測多個指標，檢測效率高，可進行高通量檢測。	顯色本底高，定量分析范圍受限。
PCT	早期嚴重全身性細菌感染。	局部感染和慢性感染。
TRFIA	示蹤物穩定，靈敏度較高，適用于超微量分析，定量分析量程寬，可排除非特異性熒光。	成本高，需要昂貴的檢測儀器；超微量分析時易受激發光的雜散光影響。
PETIA	穩定性好，成本相對低，普通生化分析儀即可檢測。	靈敏度較低。
CLIA	抗干擾能力強，成本相對較低。	檢測速度慢。
ELISA	成本低，適用于定性檢測。	適用于半定量。
RIA	靈敏度高，適于微量分析。	具有放射性，會對人體或環境造成污染；且不穩定，效期短不易保存，重復性差，不能廣泛應用。

參考文獻

[1] 何忠發, 駱安德, 盧彥蕙等. 胃蛋白酶原的定量檢測方法及臨床應用的研究進展[J]. 廣西醫學, 2016, 38(3): 398-401.
[2] 黃飚, 肖華龍, 張祥瑞等.胃蛋白酶原Ⅰ時間分辨熒光免疫分析法的建立[J].中華微生物學和免疫學雜志, 2004, 24(6): 492-495.
[3] 周偉, 金磊, 孟偉等. 胃蛋白酶原激光化學發光免疫測定方法的建立[J].中國醫藥指南, 2013, 11(12): 64-66.
[4] Mertz HR, Peterson WL, Walsh JH. ”Familial hyperpepsino genemia”and Helicobacter priori infection[J]. Am J Gas troenterol, 2000, 95(4): 943-946.
[5] 趙建業、朱春平, 李兆申. 血清胃蛋白酶原、胃泌素-17、幽門螺桿菌抗體檢測對萎縮性胃炎和胃癌的診斷價值[J]. 胃腸病學, 2016, 21(6): 376-379.
[6] Hemaila I, DakubuS, Mukkala VM, et al. Europium as a label in time-resolved immunofluorometric assay. Anal Biochem, 1984, 137: 335-338.
[7] 朱國民, 邱峰. 三種血清胃蛋白酶原檢測方法在胃癌篩查中的比較分析[J]. 檢驗醫學, 2012, 27(11): 961-962.
[8] 陶偉, 李亞俊, 楊力. 慢性胃炎、胃潰瘍及胃癌患者血清胃蛋白酶原水平的研究[J]. 寧廈醫科大學學報, 2011, 33(11):1054-1057.
[9] 李萌, 吳詩琴. 兩種胃蛋白酶原檢測方法比較及偏倚評估[J]. 國際檢驗醫學雜志, 2015, 36(18):2706-2710.
[10] 楊瑞生, 韓正大, 馬芬等. 胃癌篩查時血清胃蛋白酶原4種檢測方法的比較分析[J]. 中國醫學創新, 2012, 9(6): 78-79.
[11] 李方和,龔勁松. 流式熒光免疫微球分析技術的原理與特征[J].咸寧醫學院學報, 2001,15(1):73-76.