血清淀粉樣蛋白A（SAA）抗體的制備

SAA是一種急性時(shí)相蛋白，當(dāng)炎癥或感染急性期在體內(nèi)含量迅速升高，當(dāng)感染得到控制后又會迅速恢復(fù)至正常水平，是常見的炎癥標(biāo)志物。對體內(nèi)SAA水平進(jìn)行檢測對于細(xì)菌及病毒感染的診斷具有重要的指導(dǎo)意義。

SAA抗體是SAA檢測試劑盒的核心原料，目前SAA抗體的制備可以分為利用雜交瘤技術(shù)制備和利用基因工程制備兩大類，兩種生產(chǎn)方式在制備周期、實(shí)驗(yàn)難度、抗體產(chǎn)量等方面有所區(qū)別，本文就SAA抗體的制備相關(guān)知識點(diǎn)做一個(gè)介紹。

雜交瘤技術(shù)制備SAA抗體

雜交瘤技術(shù)是目前主流的SAA抗體制備方式，利用SAA抗原蛋白免疫宿主（通常為Balb/c小鼠），對宿主進(jìn)行4-5次免疫后取其脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合得到雜交瘤細(xì)胞。再對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行陽性克隆篩選及單克隆篩選得到雜交瘤細(xì)胞單克隆。得到雜交瘤單克隆細(xì)胞株后，對細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)（可以將單克隆細(xì)胞株注入小鼠腹水進(jìn)行體內(nèi)培養(yǎng)，也可以利用培養(yǎng)瓶進(jìn)行體外培養(yǎng)）即可得到鼠源SAA單克隆抗體。

對于免疫熒光、膠體金、膠乳比濁等免疫檢測平臺，僅僅有一株SAA抗體是不夠的，至少需要一對能夠同時(shí)與SAA蛋白結(jié)合的配對抗體才能夠完成對SAA蛋白的檢測。因此，需要篩選得到多株單克隆雜交瘤細(xì)胞株并制備得到多種不同的SAA單抗，利用雙抗夾心ELISA的方式進(jìn)行配對抗體的篩選。

基因工程技術(shù)制備SAA抗體

利用雜交瘤技術(shù)制備SAA存在雜交瘤細(xì)胞退化及批次產(chǎn)量少等問題，利用基因工程技術(shù)可以很好的解決這些問題。

體外重組技術(shù)制備重組SAA抗體首先需要獲得SAA的抗體序列（通過對雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行測序即可獲得SAA抗體序列），抗體序列合成基因并將基因?qū)氲捷d體之中構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒，將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到合適的表達(dá)系統(tǒng)中（通常為哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)）進(jìn)行重組表達(dá)，最后通過protein A/G純化得到重組SAA單抗。

與雜交瘤細(xì)胞相比基因序列是可以永久保存的，不用擔(dān)心因雜交瘤細(xì)胞退化而導(dǎo)致無法生產(chǎn)抗體的問題。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)

哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建兩種制備方式。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染能夠快速的表達(dá)得到SAA抗體，但是產(chǎn)量較低。穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建的實(shí)驗(yàn)周期比瞬時(shí)轉(zhuǎn)染長，實(shí)驗(yàn)難度也較大，但是利用穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)SAA抗體的長期、穩(wěn)定、大量的生產(chǎn)。

如果SAA抗體的需求量很大，利用瞬轉(zhuǎn)技術(shù)需要進(jìn)行多個(gè)批次的制備才能夠滿足需求，此時(shí)會存在批間差的問題，但是利用穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建則能很好的滿足客戶的需求（可一次性生產(chǎn)克級至百克級SAA抗體）。

雜交瘤技術(shù)與基因工程技術(shù)對比

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