D-二聚體檢測(cè)方法和檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

D-二聚體是交聯(lián)纖維蛋白降解后形成的纖維蛋白降解產(chǎn)物中最小的片段，其含量增高反映了體內(nèi)高凝血狀態(tài)和繼發(fā)纖溶活性增強(qiáng)。D-二聚體含量檢測(cè)對(duì)于原發(fā)性和繼發(fā)性纖溶鑒別以及溶栓治療監(jiān)測(cè)方面具有重要價(jià)值。目前D-二聚體檢測(cè)方法也比較多樣化，包括酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定實(shí)驗(yàn)（ELISA）、膠乳凝集免疫比濁法、免疫金標(biāo)法等等，每種方法都有各自特點(diǎn)，總體來(lái)看，敏感性較高，但特異性不一。本文主要對(duì)D-二聚體的不同檢測(cè)方法進(jìn)行介紹，并總結(jié)了每種方法的特點(diǎn)。

D-二聚體檢測(cè)方法

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定實(shí)驗(yàn)（ELISA）

ELISA檢測(cè)主要基于雙抗夾心法，關(guān)鍵需要找到一對(duì)配對(duì)抗體。將一株D-二聚體單抗包被于聚丙乙烯塑料板，另一株單抗用辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記。將待測(cè)樣品加入板孔中，待測(cè)物中的抗原會(huì)與板孔中包被的抗體結(jié)合，在加入酶標(biāo)抗體后形成包被抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，最后加入底物顯色。最終根據(jù)吸光度判定樣品中抗原的量，抗原量與吸光度值成正比。

ELISA檢測(cè)方法具有靈敏度高、定量準(zhǔn)確等特點(diǎn)，但操作步驟較多，比較繁瑣，整個(gè)過(guò)程消耗時(shí)間長(zhǎng)，而且影響因素較多，所以不適合急診使用。

膠乳凝集法

經(jīng)典的膠乳凝集法是將被檢血漿中D-二聚體或FDP與包被在膠乳顆粒上的單克隆抗體發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng)，進(jìn)行定性或半定量測(cè)定。

膠乳凝集法操作簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)，適用于床旁檢測(cè)，常作為篩查試驗(yàn)用。為定性試驗(yàn)，半定量時(shí)費(fèi)試劑，結(jié)果判斷有主觀差異，敏感性低于ELISA。

免疫金標(biāo)法

將抗D-二聚體單克隆抗體吸附在多孔薄膜并粘放在有多層吸收墊的塑料盤(pán)上，被檢標(biāo)本加入后即與該單抗結(jié)合，然后加入膠體金標(biāo)記的抗體，形成抗體-抗原-金標(biāo)抗體復(fù)合物，在薄膜上產(chǎn)生紅色的斑點(diǎn)。通過(guò)肉眼觀察或用折射儀讀數(shù)，紅色強(qiáng)度與血漿中抗原含量成比例。

此方法具有膠乳凝集法簡(jiǎn)單、快速，適用于急診測(cè)定的優(yōu)點(diǎn)，又具有ELISA能夠準(zhǔn)確定量的特點(diǎn)。但易受白細(xì)胞、血小板、類(lèi)風(fēng)濕因子、肝素及血脂等物質(zhì)的干擾，特異性不強(qiáng)，在不同報(bào)道中其敏感性和陰性預(yù)測(cè)值差別較大。

膠乳增強(qiáng)型免疫比濁

膠乳增強(qiáng)免疫比濁法是樣本中抗原與包被在膠乳顆粒上的單克隆抗體發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，在一定的緩沖體系中產(chǎn)生凝集而導(dǎo)致濁度增大，濁度的變化與抗原濃度成正比。

此方法具有操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確定量、敏感度高等優(yōu)點(diǎn)，可滿足急診需要，在臨床研究中應(yīng)用越來(lái)越廣泛。但需要專(zhuān)門(mén)儀器測(cè)定，成本較高。

隨著技術(shù)的發(fā)展，D-二聚體測(cè)定的方法也更加多樣化。對(duì)臨床而言，既希望測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，又需要測(cè)定簡(jiǎn)便快速，如此才更有利于患者的及時(shí)診斷和治療。但實(shí)際上，每種檢測(cè)方法都有自身的優(yōu)缺點(diǎn)，根據(jù)實(shí)際情況選擇合適的方法，免疫金標(biāo)法、膠乳增強(qiáng)型免疫比濁等都比較適合急診使用。

D-dimer檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

D-dimer檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

• 無(wú)統(tǒng)一的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)
• 目前有超過(guò)30多種檢測(cè)方法和20多種單抗被使用
• 存在兩種報(bào)告單位：D-二聚體（DDU）和纖維蛋白原當(dāng)量（FEU）
• 抗體對(duì)D-二聚體不同片段有不同的親和力
• 不同的試劑有不同的干擾情況

D-二聚體試劑標(biāo)準(zhǔn)（中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)討論稿）

• 陰性預(yù)測(cè)值

結(jié)合臨床診斷的驗(yàn)前概率進(jìn)行D-二聚體檢測(cè)，其陰性預(yù)測(cè)值不應(yīng)低于95%。

• 測(cè)試范圍

涵蓋制造商提供的用于排除診斷的臨界值1/2到4倍的臨床標(biāo)本測(cè)定值。

• 線性

D-二聚體試劑在測(cè)試范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.98。

• 重復(fù)性

用正常質(zhì)控血漿日內(nèi)重復(fù)測(cè)試所得的變異系數(shù)（CV）不超過(guò)15%，用高值異常質(zhì)控血漿同日內(nèi)重復(fù)測(cè)試所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）不超過(guò)10%。

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